产品货号：
BTN13-14880
中文名称：
创伤弧菌PCR试剂盒
英文名称：
Vibrio vulnificus PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是百奥莱博公司基于PCR技术开发的专门检测创伤弧菌的试剂盒。
保存：-20℃，有效期一年。
引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
二、设置PCR反应
三、电泳分析
相关搜索：创伤弧菌PCR试剂盒，创伤弧菌检测，Vibrio vulnificus PCR Kit
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)为全球重要之海洋致病细菌，与霍乱弧菌、肠炎弧菌并列为造成人类感染疾病之三大弧菌之一。其自然生存于河海交界之处，因此又称海洋弧菌，是需要较高盐分才可生长的一种革兰氏阴性的嗜盐性弧菌。若接触受该菌污染的海产，如生蚝等食物、被海水污染，或遭海生鱼贝类、鱼具刺伤等，都可能是创伤弧菌进入人体的致病途径。感染此菌，临床上常造成严重的败血症及肢体坏死，过程相当迅速且死亡率高、严重的伤口感染、及引起胃肠道感染等。创伤弧菌一般通过分离培养进行检查，检查周期较长；快速灵敏的检出创伤弧菌对于科研和医疗都具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据创伤弧菌DNA高度保守区设计，in silico分析发现它只能检测创伤弧菌，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
- 本制品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
- 本制品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×PCR MasterMix | 500μL |
| 超纯水 | 1mL |
| 创伤弧菌PCR引物混合液干粉 | 50T |
| 创伤弧菌PCR阳性对照(1×104拷贝/μL) | 250μL |
保存：-20℃，有效期一年。
引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(1×104拷贝/μL，本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。
二、设置PCR反应
- 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个
样品管PCR
阴性对照PCR
阳性对照2×PCR MasterMix 各10μL 10μL 10μL 创伤弧菌PCR引物混合液 各2μL 2μL 2μL 制备的N+2个DNA样品 各8μL 不加 不加 超纯水 不加 8μL 不加 创伤弧菌PCR阳性对照(1×104拷贝/μL) 不加 不加 8μL - 上机进行PCR扩增，PCR反应参数：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(30个循环)95℃ 15秒 55℃ 60秒 65℃ 60秒 终延伸 72℃ 10分钟
三、电泳分析
- 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
- 阳性样品预期得到的扩增产物长度为110bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。
- 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。
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